| 货号 |
名称 |
规格 |
| HIW0027 |
大肠杆菌裂解液 |
100ml
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细胞壁
大肠杆菌是实验室最常用的革兰氏阴性菌原核表达体系。革兰氏阴性菌的细胞壁由内外两层脂双层细胞膜夹杂一层肽聚糖组成。肽聚糖的糖链部分由高度重复二糖单元构成（N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸以beta-1,4糖苷键连接），肽聚糖的肽段部分通常是通过丙氨酸的氨基和胞壁酸的羧基形成酰胺键，不同肽段的侧链之间再形成交联。
裂解方法
常见的大肠杆菌裂解方法有两大类：1）物理方法，例如超声法、均质法、研磨法、冻融法等。物理方法的优势在于不引入杂质成份、成本低、效率高。超声破碎法是实验室裂菌（0.5-5L培养物）的首选；工业级别的大体积高密度发酵菌体通常使用均质破碎方法，均质破碎法可以1小时内处理10L以上菌体。研磨法和冻融法由于处理通量和效率的限制，往往只在特定的实验中使用。2）化学方法，例如有机溶剂法、酸碱裂菌法、溶菌酶消化法。化学方法的优势在于不受体积的限制，可以处理微升级别样品。其中，酸碱裂菌法速度快、效率高，但条件剧烈不利于维持蛋白质的天然构象，此方法在质粒抽提中运用最为广泛。有机溶剂法也易造成蛋白的失活，仅适合特定应用方向。
裂菌液
大肠杆菌裂解液，适用于大肠杆菌菌体的快速、温和、低成本裂解，释放菌体内蛋白。本产品为单组份，操作简单、重复性好。含有的溶菌酶可以在1分钟内破开细菌细胞壁，将其降解为胞壁二糖；含有的核酸酶可在1分钟内消化细菌的DNA和RNA，将其降解为寡聚核苷酸片段。使用本产品可以有效降低细菌裂解后上清粘度，抑制目的蛋白的降解，提高后续样品澄清效果，提升样品上柱纯化的效率，减少内毒素污染。
溶菌酶
裂菌液组份中含有溶菌酶，是一类水解细菌细胞壁的酶类总称，可以水解细菌肽聚糖的不同部位，例如T7噬菌体溶菌酶是一种酰胺酶（Amidase），可以打开肽聚糖的糖链和肽链之间的酰胺键；鸡蛋清溶菌酶可以打开肽聚糖的糖链部
分(N-acetyl glucosaminidase)；内肽酶可以切开肽聚糖肽链(Endopeptidase)。大肠杆菌裂解液含有复合溶菌酶，可以在细菌细胞壁的不同位置高效切开裂口，实现胞内蛋白质的完美释放。
核酸酶
菌体破裂以后，胞内的蛋白质、小分子、DNA、RNA都会释放到胞外，此时需要将核酸充分打断，否则带有强负电性的核酸将和目的蛋白以及杂质相互作
用，导致纯化的产物纯度降低，并堵塞纯化填料、降低柱效以及影响填料的使用寿命。在超声和均质破菌方法中，物理的剪切力无差别的打断肽聚糖、核酸以及蛋白质，为降低样品粘度，通常要多次超声或者均质。过度的物理作用不仅会造成特定的目的蛋白断裂，纯化产物出现降解条带，也会因为热量的作用造成蛋白质的活力丧失。而大肠杆菌裂解液含有重组核酸酶，它可以快速切断DNA、RNA，不会影响目的蛋白的一级序列以及高级结构的完整。因此使用本裂菌液提取蛋白，不会造成目的蛋白的“额外”破坏，是一种温和、快速、高效的破菌方案。
| 产品名称 |
大肠杆菌裂解液 |
| 产品编号 |
HIW0027 |
| 曾用货号 |
HKW3005 |
| 运输与储存 |
室温运输与储存，阴凉干燥处保存，24个月有效。 |
| 使用方法 |
每袋转膜缓冲液干粉溶解于 800 mL 水中，然后加入 200 mL 甲醇（可用无水乙醇替代）充分混匀。
对于常规中小分子量蛋白（25-70 kDa），建议转膜条件为 300 mA，30 min 左右。
对于常规大分子量蛋白，可酌情延长转膜时间，建议转膜条件为 300 mA，45-60 min。
对于 20kDa 以下小分子量蛋白，建议使用孔径更小的 0.22 μmPVDF 膜，转膜条件为 200mA，20-25 min 或 300 mA，15-20 min，亦可增加甲醇（可用无水乙醇替代）含量至 25%以加强对凝胶里小分子蛋白的固定作用。
对于分子量特别大的蛋白，延长转膜时间，建议转膜条件为 300 mA，60-90 min 或更长，亦可在转膜液中 加入适量 SDS 至终浓度 0.5‰左右，以加强蛋白从凝胶中的释放。同时，由于转膜时间较长，应注意降温模块的降温作用，必要时可中途更换新的降温模块。 |
| 注意事项 |
1.溶解后请尽快使用，不建议长期保存。
2.操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。 |
