| 货号 |
名称 |
规格 |
| HIW0002 |
IP裂解液 |
100ml
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IP 裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞或组织制备蛋白样品的裂解液。经本裂解液裂解组织或细胞得到的蛋白样本，可应用于 PAGE，western blot，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)、ChIP（Chromatin Immunopre-cipitation）和 ELISA 等对蛋白保持活性有要求的实验。本产品主要成分为 25mMTris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA 及 1% NP-40。
适用于动物或植物组织及细胞样品，也可用于真菌或细菌样品。
| 产品名称 |
IP裂解液 |
| 产品编号 |
HIW0002 |
| 曾用货号 |
HKW2012 |
| 运输与储存 |
短途冰袋（wet ice）运输。-20℃保存，有效期12个月。 |
| 使用方法 |
1.提取前准备：将试剂盒中试剂室温解冻，解冻后放置于冰上。提前4℃预冷离心机。核蛋白抽提试剂A、核蛋白抽提试剂B、核蛋白洗涤液A、核蛋白洗涤液B根据提取的样本量分别取出对应体积的试剂，在使用前按100:1添加蛋白酶抑制剂混合液（100×）备用。
2.样品预处理
2.1对于细胞：收集细胞4℃，500g离心5min，用预冷的PBS洗涤两遍，尽可能吸取残留的PBS。然后在冰置环境下，按每2×107-7×107细胞直接加入1mL的预冷核蛋白抽提试剂A。
2.2对于组织：取新鲜的动物自组织，用预冷的PBS洗净组织块上附着的脂肪和血液等杂志，用滤纸吸干水分后称重，在离心管中将组织块剪碎，然后在冰上，按每100mg组织加1mL预冷的核蛋白抽提试剂A。
3.将样品转移到合适大小的预冷处理的玻璃匀浆器中，在冰浴条件下对样品匀浆。
注：不同的样品所需匀浆次数不同，培养细胞建议匀浆1-2次，组织样本建议5-10次。鉴定方法：取20 uL匀浆2次后的细胞样品或匀浆5次后的组织样品，加入等体积的0.4%台盼蓝溶液，混匀，在显微镜下观察台盼蓝溶液染色阳性（蓝色）细胞数目的比例，当阳性（蓝色）细胞破碎达到50%即可停止匀浆，请勿过度匀浆。若阳性（蓝色）细胞比例未达到50%，适当增加1-2次匀浆，随后按照同样的方法使用台盼蓝溶液进行鉴定。 |
| 注意事项 |
1、所有步骤都需在低温下进行。
2、本试剂盒对新鲜的组织样本具有很好的提取效果，对冻存的组织样本效果相对较差，客户优先选用新鲜的样本提取。
3、不同的样品中核蛋白的含量不同，可根据实验情况调整核蛋白抽提试剂A和核蛋白抽提试剂B的使用量。
4、核蛋白抽提试剂A、核蛋白抽提试剂B、核蛋白洗涤液A、核蛋白洗涤液B在使用前添加普通型蛋白酶抑制剂混合液。用于磷酸化抗体检测还需提前加入磷酸酶抑制剂混合物。
5、本试剂盒中的普通型蛋白酶抑制剂混合液适用于常规蛋白的提取，针对特别容易降解的蛋白推荐使用增强型蛋白酶抑制剂混合液。
6、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液中含少量DTT，有轻微刺激性气味，但不含剧毒的巯基乙醇。
7、抽提得到的胞浆蛋白和核蛋白可以使用BCA法测定蛋白浓度，不适用Bradford法测蛋白浓度。
8、本试剂盒中试剂都应在室温下溶解，请勿加热。
9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴好一次性手套操作。 |
