| 货号 |
名称 |
规格 |
| HIM0060 |
FITC-Wheat Germ Agglutinin(WGA,绿光） |
100ul
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小麦胚芽凝集素 (WGA) 是一种 36kDa 的凝集素，由于它可与细胞膜上的 N-乙酰基-β-D-葡糖胺基残基和 N-乙酰基-β-D-葡糖胺低聚物偶联的特性，通常用于标记哺乳动物细胞、革兰氏阳性菌和酵母的细胞膜，以及骨骼和心脏骶膜等。当 WGA 用于心肌细胞染色时，可将心肌细胞细胞膜染出来，这样是不是肥大的细胞从图像与正常组的对比就可以看出，也可以用专门的软件对染出的细胞进行直径、面积等的测量，能够分析心肌细胞是否肥大。
| 产品名称 |
FITC-Wheat Germ Agglutinin(WGA,绿光） |
| 产品编号 |
HIM0060 |
| 曾用货号 |
HKI0052 |
| 使用方法 |
活细胞染色（以 12 孔板为例）
1. 用 1×PBS 缓冲液清洗细胞 2 次。
2. 每孔细胞加入 100 μLWG实验准备
1. 自备1×PBS 缓冲液，多聚甲醛的固定液，抗荧光淬灭封片剂，即用型 DAPI 染色液等。
2.初次使用本产品时，恢复室温的本产品低速离心 1 min并根据单次实验使用量进行分装，防止溶剂挥发损失。置于-20℃避光保存。
3. 正式实验前，吸取5 μL FITC-Wheat Germ Agglutinin(WGA,绿光）与1 mL PBS混匀，即得到WGA绿光工作液。不同类型的细胞染色效果可能不同，最佳染色工作浓度请参考文献或进行预实验摸索。
WGA绿光工作液现配现用，室温避光保存，当天使用。 操作步骤
A绿光 工作液，37℃下避光孵育 10-30 min。注意密封，防止
液体蒸发。
3. 孵育完成后，用 1×PBS 缓冲液缓冲液清洗细胞 3 次，每次 5 min。
4. 以荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果。
固定细胞染色（以 6 孔板细胞爬片为例）
1. 培养好的细胞爬片（密度至少达到 50%汇合度），去除培养液，用 37℃预热的 1×PBS 缓冲液清洗细胞 2 次。
2. 加入适量固定液覆盖细胞，室温固定 10-30 min。
3. 吸除固定液，用 1×PBS 缓冲液室温清洗细胞 2-3 次，每次 10 min。
4. 细胞爬片稍微甩干后，用组化笔画圈使细胞位于圈中央。取 100 μL WGA绿光工作液完全覆盖细胞， 37℃避光孵育 30 min。注意密封，防止液体蒸发。
5. 孵育完成后，用 1×PBS 缓冲液清洗细胞 3 次，每次 5 min。
6. 向爬片上滴加即用型 DAPI 染色液覆盖细胞，进行细胞核染色 8 min。用 1×PBS 缓冲液清洗 细胞 2-3 次，每次 30 s-1 min。（可选做）
7. 细胞爬片稍甩干后，倒置在滴加一滴抗荧光淬灭封片剂的载玻片上，用纸巾吸掉多余封片剂。
8. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果，选择 488（Ex/Em=493/517 nm）和 DAPI（Ex/Em=364/454 nm）通道。
组织切片染色
1. 组织切片前处理：
冰冻切片（新鲜组织冰冻切片或固定组织冰冻切片）室温静置数分钟，恢复至室温；切片浸没在固定液中室温固定 10-15 min，取出自然晾干，然后以纯水或 1×PBS 缓冲液中润洗，去掉组织上残存的固定液。
石蜡切片脱蜡复水；
将组织切片（石蜡切片或固定组织冰冻切片）置于盛满 EDTA 抗原修复缓冲液（pH 8.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火 8 min 停火 8 min 转中低火 7 min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于 1×PBS 缓冲液中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5 min。
2. 染色：组织切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈。向圈内滴加 50-100 μL WGA绿光工作液覆盖组织，37℃避光孵育 30 min。注意密封，防止液体蒸发干片。
3. 洗涤：孵育完成后，用 1×PBS 缓冲液清洗样本 3 次，每次 5 min。
4. 染核（可选）：向样本上滴加即用型 DAPI 染色液覆盖细胞，进行细胞核染色 8 min。用 1×PBS 缓冲液清洗样本 2-3 次，每次 30 s-1 min。
5. 封片：切片稍甩干后，在样本上滴加一滴抗荧光淬灭封片剂，用合适的盖玻片进行封片。
6. 镜检：荧光显微镜 或激光共聚焦显微镜观察结果，选择 488（Ex/Em=493/517 nm）和 DAPI
（Ex/Em=364/454 nm）通道。 |
| 注意事项 |
1.经过长时间固定后的样本（如石蜡切片），必须经过高温修复过程，否则阳性结果偏弱或接近于无。
2.WGA 染色做心肌分析时对心肌组织要求较高，必须保证组织完整、均匀.
3.对于细胞样本，染色前避免使用通透液，否则会造成细胞质结构成分着色。
4.荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快完成检测及观察拍照。
5.操作时请穿实验服，并佩戴一次性手套。 |
