| 货号 |
名称 |
规格 |
| HIM0040 |
TSA双标检测试剂盒（即用型） |
50T
|
TSA荧光多色染色试剂盒，核心原理是基于高效的酪酰胺信号放大技术（简称TSA技术），广泛适用于石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、类器官等多种组织样本的免疫荧光多重染色实验。本试剂盒通过荧光标记酪胺盐在辣根过氧化物酶（HRP）催化过氧化氢（H2O2）的作用下，与周围的蛋白残基形成稳定共价键结合位点，再结合抗体洗脱液的抗体洗脱技术，可高效实现多重荧光染色，兼顾检测稳定性与实验便捷性。
（冰冻切片、细胞爬片需要配合抗体洗脱液HIM0068使用）
| 产品名称 |
TSA双标检测试剂盒（即用型） |
| 产品编号 |
HIM0040 |
| 曾用货号 |
HKI0000-2 |
| 使用方法 |
1.样本准备
a.石蜡切片：环保型脱蜡液Ⅰ 10min→环保型脱蜡液Ⅱ 10min→环保型脱蜡液Ⅲ 10min→无水乙醇Ⅰ 5min→无水乙醇Ⅱ 5min→95%乙醇 5min→85%乙醇 5min→75%乙醇 5min，蒸馏水洗2次（1 min/次）。
b.冰冻切片：冰冻切片恢复室温后，固定10～30min(丙酮或甲醇/丙酮混合液或4%多聚甲醛)，PBS洗涤3次(5 min/次)。
c.细胞爬片或者细胞涂片：细胞样本4%多聚甲醛室温固定10～30min，PBS洗涤3次（5 min/次）。
2.抗原修复
a.依据组织类型及抗体特性，遵循“修复液pH值越高（EDTA 9.0 >EDTA 8.0 > 柠檬酸 6.0） 物理作用越强（高压修复 > 微波修复 > 水浴修复 > 酶修复） ”的原则选择适配方案。
b.常规切片置于修复盒中，加入200 mL EDTA 9.0修复液，密封防蒸发。采用分段微波修复法：中高火8 min → 静置7 min → 中低火8 min(全程严禁干片) 。自然冷却后，切片浸入PBS (pH 7.4)，于摇床振荡洗涤3次(5 min/次） 。
c.冰冻切片：冰冻切片滴加0.3%TritonX-100破膜液通透20min(检测膜表达蛋白可省略此步) ，PBS洗涤3次（5 min/次）。
d.细胞爬片或者细胞涂片：细胞样本滴加0.3% Triton X-100破膜液通透20min(检测膜表达蛋白可省略此步) ，PBS洗涤3次（5 min/次）。
3.画圈和双氧水封闭
切片沥干后，以组化笔沿组织边缘约 3 mm 处划定反应区域，待干后以纯水或 PBS 润湿。滴加内源性过氧化物酶阻断剂，室温避光孵育 15 min。随后将玻片浸入 PBS (pH 7.4) ，于摇床振荡洗涤3次（5 min/次） 。
4.封闭
切片稍微甩干后，向组织上滴加3% BSA或血清室温封闭30 min。
5.孵育一抗
弃去封闭液，滴加经抗体稀释液配制的一抗。将切片置于含湿润环境的避光湿盒中，于4°C孵育过夜或37°C孵育1-2 h（盒内加水以防液体蒸发）
6.孵育二抗
切片经PBS (pH 7.4) 振荡洗涤3次（5 min/次），稍沥干后滴加适配一抗种属的二抗（或即用型POLY-HRP羊抗鼠/兔多聚二抗）。室温避光孵育40-60 min。
7.TSA显色
切片经PBS洗涤3次（5 min/次），临用前配制TSA显色液：将1 μL TSA-Flare(Plus）浓缩染料加入400 μL超敏染料稀释液中，颠倒混匀（需现配现用，30 min内用完）。每张切片滴加50–100 μL显色液覆盖组织，室温反应3–10 min。反应结束后，PBS洗涤3次（5 min/次）。
8.抗体洗脱
切片滴加足量抗体洗脱液完全覆盖组织（抗体洗脱液需要预热至37℃），37℃放置 8分钟，弃去洗脱液，再次滴加足量抗体洗脱液完全覆盖组织，37℃放置8分钟，弃洗脱液，PBS洗涤3次（5 min/次），洗脱掉一抗及相应二抗（核标记抗体可将每次孵育时间延长到10分钟）。
9.荧光多标
重复3-8步骤，在步骤7中依次换用不同荧光染料，每重复一次完成一轮标记，直至完成第2轮标记，第2轮标记重复3-7步骤，无需抗体洗脱。
10.DAPI复染细胞核及封片
切片沥干后，滴加DAPI染色液，室温避光孵育10 min。PBS洗涤3次（5 min/次），稍沥干，使用抗荧光淬灭封片剂封片。
11.拍照扫描
采用荧光显微镜、共聚焦显微镜、多通道扫描仪或多光谱成像系统进行观察与成像。 |
| 注意事项 |
1.本产品仅作科研用途。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
| source of reagents |
发表[中文论文]请标注：荧光单标信号放大试剂盒 (HIM0040)由杭州浩克生物技术有限公司提供。
发表[英文论文]请标注：荧光单标信号放大试剂盒 (HIM0040) was kindly provided by Hangzhou Haoke Biotechnology Co., Ltd. |
| 试剂准备 |
1.自备环保型脱蜡透明液（HX40005）；
2.自备无水乙醇；
3.自备抗原修复液：根据抗体与组织类型选择，可选柠檬酸抗原修复液（pH 6.0）（HIM0001）、Tris-EDTA抗原修复液（pH 8.0）（HIM0004）或Tris-EDTA抗原修复液（pH 9.0）（HIM0005）；
4.自备PBS磷酸盐缓冲液（HIM0019）；
5.自备封闭用试剂，推荐使用：3% BSA(HIM0022）、兔血清（HIM0021）、山羊血清（HIM0024）；
6.自备抗体稀释液（HIM0020）；
7.自备实验所需一抗；
8.试剂盒标配5 mL高灵敏度POLY-HRP羊抗鼠/兔二抗（即用型）。若需全程采用多聚酶标二抗，请自备以下即用型试剂：POLY-HRP羊抗鼠/兔HIM0013（即用型）；POLY-HRP羊抗鼠HIM0012（即用型）；POLY-HRP羊抗兔HIM0011（即用型）。
9.冰冻切片需要自备丙酮或甲醇/丙酮混合液；
10.细胞样本需要自备4%多聚甲醛（HX10001）。 |
| 仪器准备 |
1.脱色摇床；
2.湿盒；
3.微波炉/抗原修复仪；
4.荧光显微镜/共聚焦显微镜/多通道荧光扫描仪；
5.修复盒；
6.免疫组化笔（HIM0018）；
7.盖玻片。 |
