| 检测原理 |
5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸) (5,5'-Dithio-bis-(2-nitrobenzoic acid), DTNB),又称为6,6′-二硝基-3,3′-二硫代苯甲酸、Ellman试剂(Ellman Reagent)、二硫代硝基苯甲酸或双(3-羧基-4-硝基苯基)二硫,是一种与巯基相互作用的水溶性试剂,可用于组织、蛋白质和多肽中游离巯基含量的测定,基本反应原理如下:样品中的蛋白质通过变性处理,原有构像发生改变,蛋白质肽链松散开,从而使原来埋藏于蛋白质内部的巯基(-SH)暴露,所有游离巯基(R-SH)与DTNB反应生成黄色可检测的2-硝基-5-硫代苯甲酸盐阴离子(TNB)和混合二硫化物(R-S-TNB),TNB在412nm处有强吸收峰,通过酶标仪测定此处的吸光度,并以谷胱甘肽为标准品,可计算出样品中总游离巯基含量。 |