作者|NIRO

来源：NIRO（ID：NIRO-keyanmiao）

编辑|澹泊研究僧

我们知道对基因和蛋白定量中 qPCR 和 WB 实验是不可缺少的实验，二者相辅相成，相互验证。在理论上，qPCR 实验结果和 WB 实验结果趋势是一致的。但是如果出现 qPCR 实验结果和 WB 实验结果的趋势不一致怎么回事呢？

其实这种实验结果趋势不一致在实际情况中是比较常见的现象！下面我们先从实验技术层 面、生物学层面及数据处理与分析层等三个方面进行分析。

qPCR 实验和 WB 实验结果不一致的原因分析

1.实验技术层面的原因

(1) 样品制备与处理

在 qPCR 中，如果总RNA 样品提取环节出现失误，如取材到液氮速冻耗时过长导致 RNA 降解， 或在制样时没有保持低温环境、没有有效防范外源性 RNA 酶的污染，都可能影响 RNA 的质量和 qPCR 结果的准确性。

在 WB 实验中，蛋白样品制备环节同样至关重要。如果取材到液氮速冻耗时过长或制样时没有 保持低温环境，可能导致蛋白降解。此外，如果没有加蛋白酶抑制剂，也可能导致蛋白降解。 另外，如果蛋白发生可逆性沉淀，如低温保存时蛋白浓度高导致沉淀，或 pH 值过低导致蛋白 沉淀，也会影响 WB 结果的准确性。

(2)实验操作的精确性

在进行 qPCR 时，如果引物设计策略有误、引物形成二聚体、熔合曲线呈现双峰，或引物实际 扩增效率未检测而默认为 100%计算，都可能导致结果不准确。

在 WB 实验中，如果电泳、转膜、抗体孵育、发光成像等环节出现失误，如电泳电压不稳定、 转膜不完全、抗体浓度不合适、曝光时间不当等，也会影响结果的准确性。

2.生物学层面的原因

(1)翻译后调控或修饰

有时蛋白的 mRNA 水平可能保持不变，但经过翻译过程后蛋白的产量显著增加。因此，即 使 mRNA 水平没有变化，也可能出现蛋白水平升高的情况。相反，如果存在一些影响翻译 过程的因素，也可能导致 mRNA 水平高而蛋白水平低的情况。

同时，蛋白质在合成后可能会经历各种翻译后调控或修饰过程，如磷酸化、糖基化、泛素化等。 这些修饰过程可能影响蛋白质的稳定性、活性或定位，从而导致 WB 结果与 qPCR 结果不一致。