酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是目前应用最广泛的免疫学检测技术，是将抗原-抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后的显色反应判定结果。一般用酶标测定仪测定吸光度（O.D.值）来反映抗原或抗体含量，灵敏度可达ng/ml水平甚至pg/ml水平。ELISA是一种快速、灵敏、准确可靠的定量分析方法。
然而，用于ELISA检测的常见样本类型包括血液（血清、血浆），组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清等；特殊样本类型包括痰液、肺泡灌洗液、红细胞裂解液、唾液、乳汁、腹水等。样本的处理对于ELISA实验的成功有着举足轻重的作用。这些样本的收集时间、处理方法和保存方式都会影响ELISA实验的结果。下面我们为大家提供一些在ELISA检测中碰到特殊样本的处理方式，以供参考。
一、常见样本类型的处理方法推荐：
Ⅰ、血液样本
血液采取后应尽快进行处理，使血清（浆）从与血细胞接触的全血中分离出来。
血清与血浆的区别：
血清是血液凝固后缺少纤维蛋原的血浆，故血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均等同于血清。
选择血清还是血浆样本？
由于血清中缺乏很多的凝血因子，但有一些凝血产物，如果是测凝血相关靶分子建议选择血浆样本；同时血浆中有纤维蛋白原，如果纤维蛋白原对待检测指标有影响，建议选择血清样本。大多数情况下二者均可以选择。
①血清：将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1,000×g离心20分钟，取上清即可，将上清置于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
②血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1,000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
Ⅱ、组织匀浆
不同类型的组织制备匀浆的方法会有所不同
①取适量组织块，在预冷PBS（0.01mol/L， pH=7.0-7.2）中清洗去除血液，匀浆前先称重。
②将组织切成小块，均匀的放入放置在冰上的装有新鲜裂解缓冲液(货号IS007，应依据目标蛋白的亚细胞定位选择不同类型的缓冲液)的玻璃均质器中（微小的组织也要如此）。（质量体积比=1:20-1:50，例如：1mL裂解缓冲液中加入20-50mg组织样本。）
③将得到的悬浊液经过超声处理至澄清。
④将制备好的匀浆液10,000×g离心5分钟，弃沉淀，上清即可用于检测或置于-20℃下保存。
Ⅲ、细胞裂解液
在分析试验之前，细胞需利用以下方法处理：
①贴壁细胞应该用冷PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，于1,000×g 离心5分钟后收集。（悬浮细胞可通过离心直接收集）。
②将收集到的细胞用冷PBS洗3次；
③将细胞用新鲜裂解缓冲液重悬至密度为107个细胞/毫升，如果需要，细胞可以进行超声波处理至溶液澄清。
④将标本于2-8℃ 1,500×g离心10分钟，弃沉淀，上清即可用于检测或置于-20℃下保存。
Ⅳ、细胞培养上清
请1,000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
Ⅴ、粪便
称取约100mg(80-120mg)粪便，加入5ml PBS，用涡旋器振荡40秒。然后匀浆粪便溶液25-30分钟。取1ml匀浆物于新的EP管中，10,000rpm离心20分钟。吸取上清液至另一个新的EP管中，即可检测，或将上清置于-20℃ 或-80℃ 保存，但应避免反复冻融。
Ⅵ、尿液
请收集清晨第一次尿液（中段尿），或24小时尿液，2,000×g离心15分钟后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。
Ⅶ、脑脊液
请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。
二、特殊样本类型的处理方法推荐：
Ⅰ、痰液
选择痰液中较为粘稠部分称重，加两倍于痰量的0.1%DTT(二硫苏糖醇)37℃恒温水浴振荡5分钟，再加入两倍于痰量的PBS缓冲液继续振荡15-20分钟，150目的金属丝网过滤，1,000×g离心10分钟吸取上清液-20℃或-80℃冷冻保存。
Ⅱ、肺泡灌洗液
1,000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
Ⅲ、唾液
用唾液样本采集管收集样本，然后于2-8℃ 1,000×g离心15分钟，取上清即可检测，或分装后于-20℃或-80℃保存。避免反复冻融。
注意：唾液一般饭后半小时内不易采集，因为刚进食的唾液中富含唾液淀粉酶，最好空腹时段采集。
Ⅳ、红细胞裂解液：
①将全血于1,000×g离心20分钟，弃上清收集细胞。
②将收集的细胞用预冷的PBS（pH 7.0-7.2）洗涤三次。
③用预冷的PBS重悬细胞，放于-20℃冷冻。然后融化细胞，轻轻混合。反复冻融三次。
④于2-8℃ 5,000×g离心10分钟，除去细胞碎片。
⑤取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，尽量避免反复冻融。
Ⅴ、乳汁
将标本在2-8℃ 10,000×g离心15分钟，收集水样成份，每次离心两次以上，重复3次即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
Ⅵ、精浆
精液标本收集于无菌容器中，室温或37℃水浴箱中液化。待精液完全液化后，将精液 4,000 rpm离心10 分钟分离精浆，即可做ELISA。
Ⅶ、胸腹水
为防止标本采集时出现凝块、细胞变性、细菌破坏自溶等，常规及细胞学检查胸腹水宜用EDTA-K2 抗凝收集，生化标本宜用肝素抗凝收集。收集后即刻离心，2,500r/分钟离心5分钟。取上清即可用于检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存。
除了动物来源的样本，还有植物样本在检测之前也需要进行相应的处理。在这里我们选取了2种植物样本收集处理方法，以供参考：
Ⅰ、植物样本中提取化学分子
①取新鲜材料或贮存材料（用100％甲醇固定，放置-10℃冰箱中至待测时）1g，剪碎，加入6ml预冷的80％甲醇溶液，匀浆5分钟.
②匀浆液在4摄氏度下振荡（或搅拌）24h，过滤。
③残渣再用2ml甲醇液振荡1h。反复二次，滤液混合。
④ 将滤液在旋转蒸发器上干燥减压蒸发（36～38℃）至2ml。
⑤再加入1ml石油醚提取部分色素，弃掉石油醚层，取下层甲醇液层。
⑥继续减质浓缩至水溶液。在此水溶液中含有IAA、ABA、GA和CTK等。
Ⅱ、植物样本中蛋白质提取方法
①根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当调整加入量），准备提取液放在冰上。
②把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。
③用离心机离心8,000rpm40分钟（4℃）或11100rpm20分钟（4℃）
④提取上清夜，样品制备完成。
样本的处理是实验成功的第一步。处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程，由于蛋白容易变性降解，处理过程应尽量温和。样本处理之后的保存也非常重要，尤其注意不要反复冻融，样本处理之后可分装密封保存， 4℃保存应小于1周，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月。在标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。
